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　　小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書

　　BS-9418小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒

　　一、試劑盒基本信息

　　小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法原理設(shè)計(jì)，用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、組織勻漿等樣本中的PFN2蛋白濃度。本試劑盒具有高靈敏度(通常≤0.137ng/mL)和良好的特異性，與相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)?。檢測(cè)線性范圍一般為0.312-20ng/mL，精密度批內(nèi)差CV<10%，批間差CV<12%?。

　　二、試劑盒組成

　　試劑盒主要包含以下組分(以96T規(guī)格為例)：

　　預(yù)包被酶標(biāo)板：8×12條(包被PFN2捕獲抗體)

　　標(biāo)準(zhǔn)品：1支(需按說明書稀釋)

　　標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液：15ml

　　生物素化檢測(cè)抗體(100×)：1支

　　生物素化檢測(cè)抗體稀釋液：12ml

　　SABC復(fù)合物：12ml

　　TMB顯色液(A/B)：各6ml

　　終止液：12ml

　　20×濃縮洗滌液：60ml

　　封板膠紙：4張?

　　三、樣本收集與處理

　　1. 樣本類型

　　適用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及其他生物體液?。

　　2. 樣本采集

　　血清?：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管收集血液，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離血清

　　血漿?：使用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清

　　組織勻漿?：加入適量生理鹽水搗碎后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清

　　細(xì)胞上清液?：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物?

　　3. 樣本保存

　　短期(48小時(shí)內(nèi))可保存于2-8℃;長(zhǎng)期保存需分裝后凍存于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融?。

　　四、實(shí)驗(yàn)操作步驟

　　1. 試劑準(zhǔn)備

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按照說明書進(jìn)行梯度稀釋(通常為1:2系列稀釋)

　　洗滌液配制?：將20×濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20稀釋?

　　2. 加樣

　　設(shè)空白孔(不加樣品及酶標(biāo)試劑)、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔

　　標(biāo)準(zhǔn)孔加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品

　　待測(cè)樣品孔先加40μl樣品稀釋液，再加10μl待測(cè)樣品(終稀釋度5倍)

　　加樣時(shí)避免觸及孔壁，輕輕混勻?

　　3. 孵育

　　封板后37℃溫育30分鐘?

　　溫育時(shí)建議將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，避免液體蒸發(fā)?

　　4. 洗滌

　　手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩盡，重復(fù)5次

　　最后一次洗滌后在吸水紙上拍干，避免殘留?

　　5. 加檢測(cè)抗體

　　每孔加入50μl生物素化檢測(cè)抗體工作液(空白孔除外)

　　37℃溫育30分鐘?

　　6. 加酶結(jié)合物

　　每孔加入50μl酶結(jié)合物工作液

　　37℃避光溫育30分鐘?

　　7. 顯色

　　每孔依次加入50μl顯色劑A和50μl顯色劑B

　　37℃避光顯色10分鐘(需定時(shí)觀察顏色變化)?

　　8. 終止反應(yīng)

　　每孔加入50μl終止液(顏色由藍(lán)變黃)

　　15分鐘內(nèi)完成OD值測(cè)定?

　　五、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　根據(jù)樣品OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相應(yīng)濃度

　　若樣品經(jīng)過稀釋，需乘以稀釋倍數(shù)得到實(shí)際濃度?

　　六、注意事項(xiàng)

　　試劑保存?：未開封試劑盒2-8℃保存;使用前室溫平衡20分鐘;濃縮洗滌液結(jié)晶屬正常現(xiàn)象，水浴加熱溶解后使用?

　　操作規(guī)范?：

　　使用一次性吸頭避免交叉污染

　　不同批次試劑勿混用

　　嚴(yán)格按說明書控制溫育時(shí)間和溫度?

　　安全防護(hù)?：

　　操作時(shí)佩戴手套和口罩

　　避免直接接觸終止液和顯色液

　　勿用嘴吸取任何試劑?

　　質(zhì)量控制?：

　　每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)包含標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣本

　　回收率應(yīng)在80-120%之間(血清樣本回收率通常為87-94%)?

　　結(jié)果解釋?：

　　本試劑盒僅供科研使用，不用于臨床診斷

　　樣本值超出檢測(cè)范圍時(shí)需適當(dāng)稀釋后重測(cè)

　　注：以上資料僅供參考，具體產(chǎn)品請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或是品牌供應(yīng)商。

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